La extracción de ADN requiere una serie de etapas básicas. En primer lugar tienen que romperse la pared celular y la membrana plasmática para poder acceder al núcleo de la célula. A continuación debe romperse también la membrana nuclear para dejar libre el ADN. Por último hay que proteger el ADN de enzimas que puedan degradarlo y para aislarlo hay que hacer que precipite en alcohol

Objetivos

  1. Realizar la extracción de ADN de tejidos animales y vegetales y reflexionar sobre la simpleza de su composición
  2. A partir de la longitud enorme de las fibras inferir que el ADN se encuentra replegado en el núcleo

Materiales

  • 1 plátano, manzana, tomate, palta, hígado de pollo, huevo u otro alimento de origen animal o vegetal
  • 100 ml de agua destilada
  • 1 vaso pp de 150 ml
  • 9 g de sal
  • 2 ml de detergente líquido al 20%
  • 1 ml de alcohol al 95% frío
  • Solución ablandadora de carne o cloroformo
  • 1 tubo de ensayos
  • 1 juguera o un mortero
  • Papel filtro
  • 1 Mechero con trípode y rejilla
  • Hielo

Protocolo

En una juguera, mezcla un plátano pelado (o el alimento que vayas a utilizar) con 100 ml de agua destilada. Muele sólo por 15-20 segundos, hasta que se produzca una mezcla homogénea. No muelas más ya que puedes romper el ADN. Si no tienes juguera muele bien el plátano con un tenedor junto con el agua.

En un vaso pp, prepara una solución de detergente o shampoo al 20% y agrega 9 g de sal de mesa. Mézclalos suavemente para no producir espuma. Puedes usar champú o lavalozas de diferentes marcas para comparar la eficiencia de la extracción al final del experimento.

Agrega a la solución preparada en el paso 2, tres cucharas soperas bien llenas de la mezcla de plátano   (u otra fruta) del paso1. Mezcla la solución con la cuchara por 5 a 10 minutos sin producir espuma

Coloca la mezcla anterior en un baño María con agua a 65º C durante 10 min. (No debe hervir ni pasar los 65 ºC)

Retira del baño maría y enfríala rápidamente, colócala en una mezcla de hielo y sal

Filtra la mezcla y deja pasar la solución durante varios minutos hasta tener aproximadamente 6 ml de filtrado para la prueba.

Coloca los 6 ml del filtrado en un tubo de ensayos limpio y agrega 1 ml de solución ablandadora de carne al 15%

Agrega 1 ml de alcohol muy frío lentamente dejando escurrir por las paredes del tubo

Deja reposar la mezcla por 2-3 minutos sin perturbarla. Es importante no agitar el tubo de ensayo

Observa el precipitado blanco del ADN en la capa de alcohol. El ADN tiene apariencia de una sustancia mucosa blanca y filamentosa

Compara las preparaciones obtenidas a partir de diferentes frutas o verduras. ¿Tienen todas las mismas cantidades de ADN?

¿Que habría pasado si antes de agregar la solución de ADN al alcohol la hubieras agitado fuertemente? ¿Por qué?

Fundamentación

 

¿Qué ha ocurrido?

El detergente contiene lauril sulfato de sodio, el cual limpia los trastes removiendo grasas y proteínas. Éste actúa de la misma manera en el protocolo de extracción de ADN, separando las grasas (lípidos) y las proteínas que constituyen las membranas que rodean la célula y el núcleo. Una vez que estas membranas se han roto, el ADN es liberado de la célula
El calor suaviza los fosfolípidos (grasas) en las membranas que rodean la célula y el núcleo. También desactiva (desnaturaliza) a las enzimas desoxirribonucleasas (ADNasas) las cuales, si están presentes, pueden cortar el ADN en pedazos tan pequeños que lo haría imposible de ver. Si las enzimas se desnaturalizan y el ADN se desenrolla, éste pierde su forma y se vuelve inactivo. Las enzimas se desnaturalizan a 60° Celsius y el ADN se desnaturaliza a 80° Celsius.
La solución ablandadora de carne actúa como una enzima.
El ADN se precipita en el alcohol fuera de la solución, donde puede ser visto. Además de permitirnos ver el ADN, el alcohol separa el ADN de otros componentes celulares, los cuales son dejados en la solución acuosa.  

 

 

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Fresia Quintana Jara
Profesor de Estado en Biología y Ciencias Universidad de Chile
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